重組乙型肝炎疫苗
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重組乙型肝炎疫苗
拼音名：Chongzu Yixingganyan Yimiao
英文名：Recombinant Hepatitis B Vaccine
書頁號：2000年版二部-1114
本品系由重組酵母或重組CHO工程細(xì)胞表達(dá)的乙型肝炎表面抗原，經(jīng)純化、滅活及加入佐劑吸附制
成。前者為重組酵母乙型肝炎疫苗，后者為重組CHO乙型肝炎疫苗。
【制法】取國家批準(zhǔn)的重組酵母乙型肝炎疫苗的原始菌種，經(jīng)一代擴增，制成生產(chǎn)菌種，逐級擴增后接
種于發(fā)酵罐，在適宜溫度和時間內(nèi)進行三級發(fā)酵，收集細(xì)胞，經(jīng)破碎，吸附粗提，疏水色譜法精提乙型肝炎表
面抗原，再經(jīng)硫氰酸鹽處理，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加入硫柳汞作為防腐劑。
取國家批準(zhǔn)的重組CHO乙型肝炎疫苗的細(xì)胞株，用靜置培養(yǎng)或旋轉(zhuǎn)法培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)乙型肝炎表面抗原
的分泌量達(dá)到每1.0mg/L時，收獲培養(yǎng)液，經(jīng)硫酸銨鹽析，2～3次密度梯度離心和色譜法純化后，再經(jīng)濃
縮，除菌濾過，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加硫柳汞作為防腐劑，分裝制成。
【性狀】本品為白色混懸液，靜置形成可搖散的沉淀。
【鑒別】取本品，照《中國生物制品規(guī)程》酶聯(lián)免疫吸附法，與已知乙型肝炎表面抗體確證其為乙型肝炎
表面抗原。
【檢查】照《中國生物制品規(guī)程》規(guī)定的方法檢查如下項目。
純度 不得低于98％。
氫氧化鋁 每1ml不得過1mg。
硫柳汞 不得過0.01％。
甲醛 不得過0.01％。
異常毒性 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
熱原 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
無菌 取本品，用直接接種法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
【效價測定】取本品，照《中國生物制品規(guī)程》測定，應(yīng)符合規(guī)定。
酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得過1.5μg。體外相對效力試驗抗原含量與參比苗的抗原比值不低于0.5。
CHO乙型肝炎疫苗的ED50與參比苗的ED50比值不低于1.0。
【類別】亞單位疫苗。
【規(guī)格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg
CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg
【貯藏與效期】在2～8℃的暗處保存。有效期2年。
一、 重組乙型肝炎（乙肝）疫苗的種類及生產(chǎn)現(xiàn)狀：
血源乙肝疫苗經(jīng)過十年上億人份人群接種，證明具有良好的安全性的免疫原性，但存在對生產(chǎn)者和獻(xiàn)血者健康有潛在危險性，生產(chǎn)成本高等缺陷，我國已經(jīng)完成同重組乙肝疫苗對血源疫苗的替代工作。
目前重組乙肝疫苗主要分為酵母，（釀酒酵母和甲基營養(yǎng)型酵母）以及中國倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表達(dá)疫苗。
（一） 釀酒酵母（Saccharomyces cervisae）
1982年Valenzuela首先在釀酒酵母中成功表達(dá)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月國默克公司的重級酵母乙肝疫苗首次取得專利并得到美國FDA的批準(zhǔn)。1989年7月比利時史克比成公司的另一重組酵母乙肝炎疫苗也取得專利。目前重組酵母乙肝疫苗的生產(chǎn)廠家除默克公司，史克公司外，我國北京天壇生物，深圳康泰公司也大量生產(chǎn)該種疫苗。其優(yōu)點為：酵母為低等真核微生物，易于在營養(yǎng)成份簡單的培養(yǎng)基中高密中發(fā)酵培養(yǎng)，利用工業(yè)化生產(chǎn)，表達(dá)量高，目前世界上大規(guī)模生產(chǎn)和上市的疫苗大多數(shù)由該表達(dá)系統(tǒng)制備而成。
（二） 甲基培養(yǎng)型酵母：
共有4種表達(dá)系統(tǒng)。甲基營養(yǎng)型酵母生產(chǎn)HbsAg具有培養(yǎng)基廉價，目的基因與酵母染色整合的優(yōu)點， 不僅可克服質(zhì)粒丟失，還可提高表達(dá)量。漢遜酵母（Hansenula Polymorpha .H.P）和畢赤酵母（Pichia plstoris .P.P）系統(tǒng)已應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。已上市的釀酒酵母和甲基培養(yǎng)型酵母表達(dá)乙肝疫苗為含HbsAg成份的疫苗。
（三） CHD疫苗： 研究證明：國產(chǎn)血源乙肝疫苗的保護效果至少維持9-10年，國產(chǎn)重組乙肝疫苗（主要為酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人們關(guān)心的重點。因為乙肝病毒缺乏易感動物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能應(yīng)用人體考核來評價，既往研究證明應(yīng)用乙肝苗阻斷HbsAg、HbeAg雙陽性母親的新一兒傳播HBV是評價乙肝疫苗的效力的最直接指標(biāo)，且1-10歲兒童對乙肝疫苗反應(yīng)較好。
二 CDH疫苗的效果
我們選擇新生兒和兒童作為疫苗考核對象，進行國產(chǎn)酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。階段結(jié)果報告如下：
免疫效果
新生兒：
（1） 母嬰傳播阻斷保護率：應(yīng)用6批國產(chǎn)量5ug酵母疫苗對163例HbsAg，HbeAg雙陽性母親的新生兒進行母嬰傳播阻礙斷效果考核，結(jié)果保護率在81.48-92.07%之間，遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報道的10ug（59.2%）和20ug（74.3%）血源乙肝疫苗,與30ug血源乙肝疫苗的保護率(85.1%)相當(dāng),而進口5ugM苗(46例,)10ugA苗(58例)和10ugS酵母疫苗(30例)的保護率分別為90.33%、86.59%和92.58%。表明國產(chǎn)酵母疫苗免疫效果達(dá)到國外同類產(chǎn)品和30ug國產(chǎn)血源乙肝疫苗的保護水平。
（2） 抗體GMT：未發(fā)現(xiàn)第一針免后3、9、12月時，HbsAg、HbeAg雙陽性孕婦所生新生兒的抗體GMT與HbsAg單陽性及健康孕婦所生新生兒抗體GMT有顯著差異。
小學(xué)生：
（1） 抗體陽性率：第一針免后1年時，進口酶母疫苗，國產(chǎn)酵母疫苗和國產(chǎn)CHO疫苗抗體陽性率在第一針免疫后3、9、12月均無顯著差異。
（2） 抗體CMT比較：第一針免后一年時，進口酶母疫苗（10ug）和國產(chǎn)CHO疫苗（10ug）抗體GMT峰值較高，國產(chǎn)酵母疫苗（5ug）較低。
免疫持久性
對應(yīng)用0、1、6月程序免疫的小學(xué)生進行了隨訪觀察。隨訪年及3年時，2批國產(chǎn)酵母疫苗具有保護性抗體（10mIU/ml）的陽轉(zhuǎn)率分別為81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而進口A和M疫苗分別為90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批國產(chǎn)酵母疫苗抗體GMT分別為123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分別為120.56；67.07和145.75；74.62。
對應(yīng)用0、1、2月程序免疫的400名小學(xué)生進行了免后4年的隨訪觀察，結(jié)果3批國產(chǎn)酵產(chǎn)疫苗陽性率分別為87.50%；77.33%；79.49%，而對照M（5ug）疫苗為91.89,抗體GMT分別為：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗體峰值6月至4年時，3批國產(chǎn)疫苗抗體陰轉(zhuǎn)率分別為7.2；5.26和13.79%，對照M苗為5.17%。無論抗體陽性一率，抗體GMT以及4年抗體陰轉(zhuǎn)率，3批國產(chǎn)疫苗和M苗間增無顯著差異。
我們最近隨該結(jié)果表明，2批國產(chǎn)酵母乙肝疫苗免后5年時抗體陽性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗體陽性率在81-69%之間。
結(jié)果表明：國產(chǎn)酵母重組乙肝疫苗的近期免疫效果達(dá)到了進口酵疫苗的免疫水平，但抗體陽性率和抗體GMT下降較快，考慮當(dāng)前乙肝疫苗供應(yīng)充足，酵母疫苗的加強接種應(yīng)提到議事日程。
三、 乙肝疫苗的發(fā)展
（一）聯(lián)合疫苗：
聯(lián)合疫苗具有減少注射針次、接種副反應(yīng)及提高接種覆蓋率的優(yōu)點。已上市的聯(lián)合疫苗如SB公司的百白破-乙肝四聯(lián)疫苗、甲-乙肝聯(lián)合疫苗，MSD公司的流感嗜血桿菌乙型肝炎偶聯(lián)疫苗等。我國全細(xì)胞百白破-乙肝四聯(lián)疫苗和無細(xì)胞百白破-乙肝四聯(lián)疫苗已完成臨床前研究，甲-乙肝聯(lián)合疫苗的開發(fā)研究制也在進行。
（二）治療性疫苗
1） 現(xiàn)有疫苗增加前S基因或替換現(xiàn)有鋁佐劑
研究開發(fā)植物來源、細(xì)胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐劑，目的在于提高細(xì)胞免疫效果，國外已有制品進行臨床研究。
2） DNA疫苗：可以肌肉細(xì)胞內(nèi)表達(dá)乙肝表面抗菌原，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，同時具有長期表達(dá)抗原，可減少加強免疫及成本低，儲存方便的特點。
3） 增大劑量酵母疫苗（10ug/支）的生產(chǎn)：
我國現(xiàn)階段生產(chǎn)和使用的酵母乙肝疫苗均為5ug/支，由于以下原因：1、實際應(yīng)用反映5ug酵母疫苗的抗體陽性率和滴度較低。2、我們對接種5ug疫苗的120例成人進行檢測，發(fā)現(xiàn)免后抗體陽性率和滴度較低，第二針免后1個月時抗體陽性率為70.00%，抗體GMT為9.83；完成全程免疫后1個月時抗體陽性率為80.77%，抗體GMT為151.46。3.MSD疫苗成人劑量為10ug/支。目前國內(nèi)正進行10ug疫苗的臨床考核。此外還應(yīng)結(jié)合臨床（血透析，腎臟移植等）和實際需要，生產(chǎn)不同劑量的乙肝疫苗。
（三）對現(xiàn)有疫苗生產(chǎn)線的生產(chǎn)能力進一步開發(fā)，以及研制高表達(dá)量的新一代重組乙肝疫苗，以降低成本，提高疫苗的覆蓋率。
（四）加強疫苗保護機制和免疫持久性的研究。
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