心肌酶譜
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對心肌酶檢查，檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死或細胞膜通透性。
1.血清酶總論：P232
LDH、AST、CK及其同I酶，α-HBD
目錄 |
一、血清酶的來源和分類：
（一）根據來源及血漿中發揮作用：
1.血漿持異酶：主要在血漿中發揮催化作用的酶類
eg：凝血酶原，凝血因子（X、ⅫI、Ⅶ）纖溶酶原，前激肽釋放酶
銅藍蛋白：是一種氧化酶，與Fe蛋白，動員有關
脂蛋白脂肪酶：參與脂蛋白中脂肪的水解和儲存
2.外分泌酶
eg：唾液和胰淀粉酶，胰脂肪酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。
在血漿中很少發揮催化作用
其濃度與其分泌腺體的功能有關
在血液中無重要的催化作用
（1）一般代謝酶：無器官特異性
（2）組織專一性酶：OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能較特異地反映肝cell的病變。
（二）根據酶促反應性質可將酶分為六類：
CHO CHO
C=0＋NADH＋H+ LDH CH－OH＋NAD+
COOH COOH
2.轉移酶類：催化底物之間進行某些基團的轉移或交換的酶類
COOH CH3 COOH CH3
（CH2）2 ＋HC－NH2 ALT （CH2）2 ＋ C＝0
C＝0 COOH HC－NH2 COOH
COOH COOH
3.水解酶：催化底物之間發生水解反應的酶類
ALP
水解
4.裂解酶類：催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。
磷酸已糖激酶
6.合成酶類（連接酶類）：催化兩分子底物合成－分子的化合物，同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂。
二、血清酶的命名：
1.習慣命名法：根據酶來源，催化反應性質及底物來命名。
底物：淀粉酶，蛋白酶
性質：脫氫酶、轉移酶
來源：胰淀粉酶、胃蛋白酶
底物＋性質：谷草轉氨酶
2.系統命名法：酶反應底物、性質均要列出，各底物間以“：”隔開
編號：（1）1為氧化還原酶類
2為轉移酶類
3為水解酶類
4為裂解酶
（2）反應作用的位置，即可用于哪個基因
1.1 －CH－OH
1.2 －C＝0
1.3 －C＝CH
1.4 －C＝NH
1.5 －CH－NH2
1.6 NADH、NADPH
（3）
1.1.1 氯化還原酶 CH－OH 受體：NAD+ NADP-
1.1.2 氯化還原酶 CH－OH 受體：細胞色素
1.1.3 氯化還原酶 CH－OH 受體：分子氧
三、血清酶的去路：
（一）血清酶的排泄：P234
2.膽汁不是血清酶排泄途徑
（二）肝或網狀內皮系統對血清酶的清除：
（四）轉入其它體液
四、酶的活性單位及生理差異：
（一）酶的活性單位：在規定條件，每分鐘催化1umol的基質發生轉化所需要的酶量。
規定條件包括：溫度、PH、緩沖系統、基質濃度及輔助因素
（二）酶的單位計算
1.根據標準計算：
（U/L）酶活力單位＝A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000
總體積-樣品+基質
2.根據反應底物的消光系數：
酶活力＝A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光系數 比色杯厚度
（三）血清酶的生理差異：
1.性別：男＞女
2.年齡：兒童 磷酸酶＞成人 嬰兒 LDH 2倍成人
3.進食：對酶活力本身無影響，但可影響比色時的濁度
4.活動：
5.妊娠：ALT、LDH、ALP↑
五、疾病時血清酶改變的機制：
（一）合成異常：P238
1.合成減少
2.合成增加
（二）酶從損傷細胞中釋放增加：
是疾病時大多數血清酶↑的主要機制
（三）其它機制：
藥物，毒物可作為酶的抑制劑
2.AST的測定：
AST 谷草轉氨酶（GOT）
天門冬氨酸氨基移換酶
一、AST分布：
廣泛分布于人體各組織、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最豐富。
主要存在線粒體中（M－AST）。胞漿中（C－AST）僅占12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述組織發生病變
時，才釋放入血。
方法學介紹
（一）賴氏比色法：＜實驗＞P115
1.原理：
COOH COOH COOH COOH
（CH2）2 ＋ CH2 AST （CH2）2 ＋ CH2
C＝O HC-NH2 37℃ HC－NH2 C＝0
COOH COOH COOH COOH
酮戊二酸 天門冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸
COOH CH3
C＝0 脫羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C＝0 ＋ →丙酮酸－2.4－ ＝ ＋H2O
COOH 硝基苯腙
2.4－二硝基苯肼 酸性，草黃色，加堿，棕紅色
與標準濃度丙酮酸生成的苯腙比色（505nm）
2.正常參考值：8-28u
3.注意事項
（1）溶血標本不能用于AST測定，因為RBC中AST是血清10倍。
（2）M－AST、C－AST理化性質，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反應，是同I酶
（3）賴氏比色法簡易性，相對準確性，所以是普及的原因
（4）難以確定在酶反應期內，產物的生成與時間成正比。
草酰乙酸是AST競爭抑制劑，隨反應進程，產物，酶反應不斷。
（5）顯色反應及底物濃度問題。
酮戊二酸也可與2.4－二硝基苯肼反應，產生另一棕色苯腙，使AST測定假陽性增高。
為了減少其干擾，波長選在490-530nm，此時丙酮酸為－酮戊二酸2倍
2.4－二硝基苯肼在堿性溶液中也可呈色，使吸光度偽性增高。
（6）A、偶聯轉氨作用：
ALT
丙酮酸＋谷氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同時，使丙酮酸消耗，AST測定結果減低。
B、產物旁路
乳酸
LDH ↑NADH＋H+
丙酮酸
↑
α-酮戊二酸＋天門冬aa AST 草酰乙酸＋谷aa.
↓MDH＋NADH＋H+
蘋果酸
所以受LDH、MDH干擾，使AST測定結果減低
（二）酶偶聯一些外連續監測法：
1.原理：L-天門冬aa.＋α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸＋谷aa.
草酰乙酸＋NADH＋H+ MDH L-蘋果酸＋NAD+
340nm
吸光度下降值，計算AST活力
2.參考值：男＜40u/L 37℃
女＜35u/L 37℃
3.注意事項：
（1）采血后立即分離血清，避血溶血
血清與血塊不可長時間設置在一起
（2）血清，室溫4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變
（3）抗凝劑血漿：
EDTA、2Na，肝素對AST無抑制作用
不能用草酸鹽抗凝劑，因為可抑制AST活性
（4）AST濃度過高，稀釋重做。
（5）不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題
（6）不存在 酮戊二酸干擾，可適當提高底物濃度使反應完全
（7）底物中存在谷氨酸脫氫酶（GLDH）
α-酮戊二酸＋NADH＋H+＋NH3 GLDH 谷aa.＋NAD+＋H2O
消耗NADH＋H+，使結果偽性增高。
（8）轎清中丙酮酸LDH
丙酮酸＋NADH＋H+ LDH 乳酸＋HAD+
消耗NDAH＋H+，使結果偏高
（9）在指示酶作用有，草酰乙酸可自動脫羧生成丙酮酸，使結果偏低。應加LDH，使之成為乳酸，從而更加準
確反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作為指示酶
三、臨床意義：
1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗時6-12h↑，48h達高峰，3-5d恢復正常
3.急性肝炎，AST，ALT同時↑，可達正常值10-30倍，黃疸前期就已↑，有助于臨床早期診斷。
3.AST同I 酶：
<黃>血清酶測定時診斷心梗的意義：
心肌C、肝C出現實質性損害 M－AST C－AST↑
M－AST↑對肝病預后有一定診斷意義
心梗M－AST↑ 所以M－AST越↑，心梗并發心衰的發病率、死亡率越↑，尤其推測死亡率方面意義更大。
4.血清乳酸脫氫酶的測定： 原理 PH對其影響
LDH 糖酵解酶，氧化還原反應
有五種同I酶LDH1－LDH5
一、LDH分布和特點：
廣泛分布，主要在腎，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述組織病變，血清中LDH。主要催化以下反應：
L-乳酸＋NAD＋ 丙酮酸＋NADH＋H+
PH堿 正反應（L-P）
PH中性 逆反應（P-L）
二、方法學
（一）比色法：＜實驗＞P122
1.原理：L-乳酸＋NAD＋ LDH 丙酮酸＋NADH＋H+
PH8.8
丙酮酸＋2.4－二硝基苯肼 → 丙酮酸－2.4－二硝基苯腙
酸 草黃色
加NaOH 棕紅色
顏色越深，酶活力越大
2.參考值：225-540u/dL
3.注意事項：產物生成量與反應時間不成比例
（1）標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。
（2）LDH受重金屬鹽、EDTA、草酸鹽的抑制。最好用血清標本
（3）血清標本2-6 數天，室溫48h
（4）準確性和重復性在酶學檢驗中最差，因為五種同I酶與底物結合能力不同，最適反應條件不同，在病理
LDH組成差異大，所以很難找出LDH最適反應條件。eg：心梗LDH1↑，肝病LDH5↑
（5）結果＞2500u/dL，將標本稀釋重做。
（二）連續監測法（酶法）：＜實驗＞P120
1.原理：L-乳酸＋NAD＋ PH8.8-9.8 丙酮酸＋NADH＋H+
逆反應比正反應速度快2-3倍 所以反應偏向左側，多用P-L
LDH
丙酸酸＋NADH＋H+乳酸＋NAD+
PH7.4
340nm處監測，吸光度下降幅度與LDH成正比。
2.參考值：240-460u/L 37℃
3.注意事項：
（1）逆反應優點：
a.試劑用量少，所需NAD+，只是L-P所用NADH＋H+的3％，樣品少
b.單位時間內吸光度變化大，逆反應線性范圍較大，酶促反應速率比正反應快3倍，利于測定。 時間短
c.酶活力隨時間的線性關系較長
（2）正反應優點：
a.NADH＋H+比NAD+穩定，價格低，易得到純品。
底物L-乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定
b.L-乳酸對LDH的抑制低于丙酮酸對LDH的抑制
（3）連續監測法可利用正、逆反應，優于比色法。
（4）金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性
試劑中可加入EDTA，使EDTA絡合金屬離子，增加NAD+穩定。
（5）NAD+不穩定，產生對LDH有抑制作用的物質。在堿性液中比在酸性液中穩定，在Tris緩沖液中比在磷酸
鹽緩沖液中穩定。
（6）某些批號的NADH＋H+還有LDH的物質，使用前檢查NADH＋H+質量，NADH＋H+溶于Tris緩沖液，分別在
260nm和340nm測吸光度，應＜2.3，若＞2.3，說明含有在260nm處有吸收峰的雜質，如NAD+、腺苷。
（8）標本不能溶血
三、臨床意義：
1.LDH↑：急性心梗、骨骼肌損傷、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黃疸及惡性腫瘤。
2.心梗：12-24h，LDH↑，48-72h達高峰，1-2W后恢復正常
3.惡性腫瘤晚期LDH，惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑
4.慢性腎小球腎炎、SLE、糖尿病腎病等病人中，尿LDH可達正常人3-6倍，尿中含多種抑制LDH活性物質，如尿素，
小分子肽類。
低PH值也可抑制LDH活性。
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