醫(yī)學(xué)微生物學(xué)/流行性乙型腦炎病毒
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本病毒首先（1953年）在日本從患者腦組織中分離獲得，因此稱日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus ,JEV），所致疾病在日本稱日本乙型腦炎（JBE）。1950年以來(lái)，我國(guó)對(duì)該病進(jìn)行了大量病原學(xué)和流行病學(xué)研究，為了與甲型腦炎相區(qū)別，定名為流行性乙型腦炎，簡(jiǎn)稱乙腦，是我國(guó)夏秋季流行的主要傳染病之一，除新疆、西藏、青海外，全國(guó)各地均有病例發(fā)生，年發(fā)病人數(shù)2.5萬(wàn)，病死率10%，大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。
目錄 |
一、生物學(xué)性狀
（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)
乙腦病毒為球形，直徑40nm，內(nèi)有衣殼蛋白（C）與核酸構(gòu)成的核心，外披以含脂質(zhì)的囊膜，表面有囊膜糖蛋白（E）刺突，即病毒血凝素，囊膜內(nèi)尚有內(nèi)膜蛋白（M），參與病毒的裝配。病毒基因組為單股正鏈RNA，全長(zhǎng)11kb，自5′至3′端依次編碼結(jié)構(gòu)蛋白C、M、E以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1—NS5，病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用，翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟，出芽釋放。
（二）敏感動(dòng)物與細(xì)胞
乳鼠是常用的敏感動(dòng)物，腦內(nèi)接種乙腦病毒后3～4天發(fā)病，一周左右死亡，腦組織內(nèi)含大量感染性病毒，是分離病毒、大量制備抗原的可靠方法。
BHK細(xì)胞系、C6/36細(xì)胞系及雞胚成纖維細(xì)胞是常用的敏感細(xì)胞，病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞圓縮、顆粒增多、細(xì)胞脫落等CPE。在培養(yǎng)上清中含有傳染性病毒，胞漿內(nèi)胞膜上可檢出特異性抗原。細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒簡(jiǎn)便易行，已取代動(dòng)物培養(yǎng)用物制備疫苗、診斷抗原，以及研究病毒復(fù)制機(jī)理、篩選抗病毒藥物等。
（三）抗原特性
乙腦病毒抗原性穩(wěn)定，在同一地區(qū)不同年代分離的毒株之間未發(fā)現(xiàn)明顯的抗原變異。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體，在感染與免疫中重要作用。用單克隆抗體做交叉血凝抑制試驗(yàn)證實(shí)E糖蛋白上有與黃病毒屬成員廣泛并叉的屬特異性抗原，也有僅與圣路易、墨里谷、西尼羅腦炎病毒交叉的亞組物異性抗原，以及僅乙腦病毒具有的種特異性抗原。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結(jié)構(gòu)與功能以及鑒定新分離的毒株，解決了常規(guī)免疫血清特異性低的問(wèn)題。
乙腦病毒囊膜糖白具有血凝特性，能凝集鵝、鴿、雛雞紅細(xì)胞，在pH6.2～6.4條件下凝集滴度高。病毒血凝素與紅細(xì)胞結(jié)合是不可逆的，但這種病毒與紅細(xì)胞形成的復(fù)合物仍有感染性，加入特異性抗體可抑制這種血凝現(xiàn)象。
（四）對(duì)理化因素的抵抗力
乙腦病毒對(duì)熱抵抗力弱，56℃30分鐘滅活，故應(yīng)在-70℃條件下保存毒株。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃，其病毒活力可維持?jǐn)?shù)月。乙醚、1：1000去氧膽酸鈉以及常用消毒劑均可滅活病毒。在酸性條件下不穩(wěn)定，適宜pH8.5～9.0。
二、致病性與免疫性
（一）致病性
我國(guó)乙腦病毒的傳播媒介主要為三帶喙庫(kù)蚊。蚊感染病毒后，中腸細(xì)胞為最初復(fù)制部位，經(jīng)病毒血癥侵犯唾液腺和神經(jīng)組織，并再次復(fù)制，終身帶毒并可經(jīng)卵傳代，成為傳播媒介和貯存宿主。在熱帶和亞熱帶，蚊終年存在，蚊和動(dòng)物宿主之間構(gòu)成病毒持久循環(huán)。在溫帶，鳥類是自然界中的重要貯存宿主。病毒每年或通過(guò)候鳥的遷棲而傳入，或病毒在流行區(qū)存活過(guò)冬。有關(guān)病毒越冬的方式可為：①越冬蚊再感染鳥類，建立新的鳥—蚊—鳥循環(huán)；②病毒可在鳥、哺乳動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物體潛伏越冬。實(shí)驗(yàn)表明，自然界中蚊與蝙蝠息息相關(guān)，蚊將乙腦病毒傳給蝙蝠，受染蝙蝠在10℃，不產(chǎn)生病毒血癥，可持續(xù)存在達(dá)3個(gè)月外，當(dāng)蝙蝠返回室溫環(huán)境3天后，出現(xiàn)病毒血癥，構(gòu)成蚊—蝙蝠—蚊的循環(huán)；③冷血脊椎動(dòng)物為冬季貯存宿主（如蛇、蛙、晰蜴等），可分離出病毒。
家畜和家禽在流行季節(jié)感染乙腦病毒，一般為隱性感染，但病毒在其體內(nèi)可增殖，侵入血流，引起短暫的病毒血癥，成為乙腦病毒的暫時(shí)貯存宿主，經(jīng)蚊叮咬反復(fù)傳播，成為人類的傳染源。特別是當(dāng)年生仔豬最為重要，對(duì)乙腦病毒易感，構(gòu)成豬—蚊—豬的傳播環(huán)節(jié)，故在人群流行前檢查豬的病毒血癥和蚊帶毒率，可預(yù)測(cè)當(dāng)年人群的流行程度，并通過(guò)豬的免疫預(yù)防，可控制本病在豬及人群中的流行。
當(dāng)帶毒雌蚊叮咬人時(shí)，病毒隨蚊蟲唾液傳入人體皮下。先在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及局部淋巴結(jié)等處的細(xì)胞中增殖，隨后有少量病毒進(jìn)入血流成為短暫的第一次病毒血癥，此時(shí)病毒隨血循環(huán)散布到肝、脾等處的細(xì)胞中繼續(xù)增殖，一般不出現(xiàn)明顯癥狀或只發(fā)生輕微的前驅(qū)癥狀。約經(jīng)4～7日潛伏期后，在體內(nèi)增殖的大量病毒，再侵入血流成為第二次病毒血癥，引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)及全身不適等癥狀，若不再繼續(xù)發(fā)展者，即成為頓挫感染，數(shù)日后可自愈；但少數(shù)患者（0.1%）體內(nèi)的病毒可通過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)增殖,引起腦膜及腦組織發(fā)炎,造成神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死、毛細(xì)血管栓塞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，甚至出現(xiàn)局灶性壞死和腦組織軟化。臨床上表現(xiàn)為高燒、意識(shí)障礙、抽搐、顱內(nèi)壓升高以及腦膜刺激癥。重癥患者可能死于呼吸循環(huán)衰竭，部分患者病后遺留失語(yǔ)、強(qiáng)直性痙攣、精神失常等后遺癥。
（二）免疫性
人受乙腦病毒感染后，大多數(shù)為隱性感染及部分頓挫感染，僅少數(shù)發(fā)生腦炎（0.01%），這與病毒的毒力，侵入機(jī)體內(nèi)數(shù)量及感染者的免疫力有關(guān)。流行區(qū)成人大多數(shù)都有一定免疫力，多為隱性感染，10歲以下兒童及非流行區(qū)成人缺乏免疫力，感染后容易發(fā)病。
本病病后4～5天可出現(xiàn)血凝抑制抗體，2～4周達(dá)高峰，可維持一年左右。補(bǔ)體給合抗體在發(fā)病2～3周后方可檢出，約存在半年。中和抗體約在病后1周出現(xiàn)，于5年內(nèi)維持高水平，甚至維持終生。流行區(qū)人群每年不斷受到帶病毒的蚊叮咬，逐漸增強(qiáng)免疫力，抗體陽(yáng)性率常隨年齡而增高，例如北京市20歲以上成年人90%血清中含有中和抗體。因此本病多見(jiàn)于10歲以下的兒童，但近些年來(lái)乙腦發(fā)病年齡有增高趨勢(shì)，值得重視。
三、微生物學(xué)診斷
乙腦早期快速診斷通常采集性期患者血清或腦脊液特異性lgm ，也可做RT—PCR檢測(cè)標(biāo)本中的病毒核酸片段，一般6個(gè)小時(shí)內(nèi)可初步報(bào)告結(jié)果。常規(guī)血清學(xué)試驗(yàn)，（H1、CF、NT）需取雙份血清，同時(shí)做對(duì)比試驗(yàn)，當(dāng)恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期≥4倍時(shí)，有輔助診斷意義，可用于臨床回顧性診斷。由于乙腦患者病毒血癥期短，直接檢出病毒抗原或分離病毒陽(yáng)性率低，較少用于診斷試驗(yàn)。
（一）特異性lgM檢測(cè)
乙腦病毒感染發(fā)病早期即產(chǎn)生特異性lgM ，病后2～3周達(dá)到高峰，故單份血清可做出早期診斷。可使用：①lgM 捕捉ELISA法（見(jiàn)23章）； ②2ME—NI法，血凝抑制抗體存在于lgM及l(fā)gG中，將早期單份血清分成二份，一份用2巰基乙醇（2ME）處理，以破壞lgM ，另一份不處理，然后同時(shí)做HI試驗(yàn)，若處理血清抗體滴度比未處理的下降≥4倍，則為lgm 陽(yáng)性； ③微量間接免疫熒光法，用熒光素標(biāo)記的抗u鏈血清，檢測(cè)已與細(xì)胞抗原片結(jié)合的lgM，根據(jù)特異性熒光顆粒，判斷血清標(biāo)本中的lgM存在。
（二）常規(guī)血清學(xué)試驗(yàn)
1．血凝抑制試驗(yàn)對(duì)乙腦診斷而言，本法特異性較低，但敏感性高，簡(jiǎn)便易行。常用于病毒的初步鑒定，確定有無(wú)乙腦病毒存在。檢測(cè)血清標(biāo)本中的HI抗體，多采用2ME—HI法。
2．補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 補(bǔ)體結(jié)合抗體僅存在于lgg 中，病后出現(xiàn)遲，消失快，適用于診斷近期感染。
3．中和試驗(yàn) 抗體存在于lgG、 lgM中，出現(xiàn)早，維持久。中和試驗(yàn)特異性和敏感性都高，但操作繁雜，需用大量動(dòng)物或組織培養(yǎng)管，需時(shí)較久，不適于臨床診斷常規(guī)使用，而在血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查和病毒鑒定上有價(jià)值。
（三）病毒分離與鑒定
取病尸腦組織研磨成10%懸液，接種1-3日齡乳鼠腦內(nèi)，待發(fā)病頻死時(shí)，取腦懸液，用單克隆抗體做中和試驗(yàn)鑒定病毒。也可接種敏感細(xì)胞（如C6/36細(xì)胞系）分離病毒。
四、特異防治
（一）特異預(yù)防
現(xiàn)用的乙腦滅活疫苗是用地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)增殖，甲醛滅活制成，初次免疫時(shí)，皮下注射2～3次，間隔7-10天，以后每年加強(qiáng)注射一次，免疫力維持半年左右，保護(hù)率達(dá)66-90%。我國(guó)已篩選出乙腦病毒減毒株，用地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)制成減毒活疫苗，只需皮下注射一次，安全有效，目前正作現(xiàn)場(chǎng)觀察。疫苗接種對(duì)象是10歲以下兒童和來(lái)自非疫區(qū)的軍民。流行區(qū)當(dāng)年飼養(yǎng)的仔豬接種乙腦疫苗，以杜絕傳染來(lái)源，也可使豬健康成長(zhǎng)。
（二）特異治療
目前乙腦治療仍采用對(duì)癥處理及支持療法，有報(bào)道用病毒唑、干擾素、恢復(fù)期血清等治療，可能減輕病勢(shì)，但已出現(xiàn)腦炎癥狀者，則無(wú)治療效果。我國(guó)采用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，制備出高中和活性乙腦單克隆抗體，經(jīng)系統(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)治療證明安全有效，95年經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)進(jìn)入Ⅰ、Ⅱ 期臨床試驗(yàn)，是一種特異免疫治療制劑。
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