寄生蟲學(xué)/寄生蟲標(biāo)本的保存
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寄生蟲標(biāo)本的保存，除制成玻片標(biāo)本永久保存外，還可用以下各種保存方法。
一、原蟲包囊和蟲卵的保存
汞碘醛液10ml與糞便1g混勻后密封在瓶?jī)?nèi)，可保存其中的原蟲包囊及蟲卵數(shù)月之久，也可在經(jīng)濃集法處理的糞便沉渣中加等量或1倍量的10%甲醛液（加熱至70℃），搖勻，用石蠟封固瓶口。
二、蠕蟲成蟲的保存
1.線蟲 生理鹽水洗凈后用加熱至70～80℃的70%酒精或巴氏液（甲醛3份，生理鹽水97份固定，冷卻后移至新的70%酒精或巴氏液中保存。小型線蟲（如旋毛蟲、蟯蟲、鉤蟲等）宜用甘油酒精（70%酒精95ml，甘油5ml）加熱固定，保存于80%酒精中；也可用冰醋酸固定約半小時(shí)后移入70%酒精或甘油酒精中保存。
2.吸蟲 小型吸蟲可置于小瓶中，加生理鹽水，用力搖蕩數(shù)分鐘，倒去生理鹽水，注入固定液。較大的吸蟲應(yīng)先放在薄荷腦酒精液（薄荷腦24g，95%酒精10ml）中，使蟲體肌肉松弛，用載玻片壓平后固定，或?qū)⑾磧艉蟮奈x放在兩片載玻片間用細(xì)線緊扎壓平后固定。
固定一般用10%甲醛，24小時(shí)后移至5%甲醛中保存；或用70%酒精固定0.5～3小時(shí)，視蟲體大小而定，再移至新的70%酒精中保存。
3.絳蟲 大型絳蟲（如豬、牛帶絳蟲）經(jīng)清水洗滌數(shù)次后，在生理鹽水（4℃）中經(jīng)過數(shù)小時(shí)或過夜，蟲體可完全伸展，此時(shí)以3%福爾馬林固定，24小時(shí)后移至5%福爾馬林中保存，必要時(shí)也可先用大玻璃板壓平后固定。小型絳蟲洗滌后可在3%福爾馬林中固定3～5小時(shí)，用載玻片輕壓，沿蓋玻片邊緣加5%甲醛固定數(shù)小時(shí)，最后保存在5%福爾馬林溶液中。
三、昆蟲的保存
1.干標(biāo)本保存系保存有翅昆蟲成蟲。可用特制的昆蟲針針插蟲體。大型昆蟲（蠅、虻等）用1～3號(hào)昆蟲針，從蟲體背面、中胸右側(cè)直插（圖21-9）。注意保持左側(cè)完整，以便鑒定。小型昆蟲（蚊、蛉、蚋、蠓等）可用00號(hào)短針自胸部腹面兩中足基部之間插入，不可刺透胸背，再用另一長(zhǎng)針從軟木片另一端插下。最后各插一硬紙片，記錄名稱、采集地點(diǎn)與時(shí)間，并將之插于昆蟲盒軟木板上或玻璃管的軟木塞上。昆蟲盒內(nèi)放入紙包的樟腦粉即可。如標(biāo)本數(shù)量多（圖21-9），可保存于塑料管（或玻璃管）中，管底放少量樟腦粉，再鋪上棉花、濾紙各一層，昆蟲標(biāo)本放于濾紙上，用軟棉紙包棉花，輕塞在昆蟲標(biāo)本上方，瓶口加軟木塞，再以蠟封之。
圖21－9 有翅昆蟲針插法
2.濕標(biāo)本保存用于保存有翅昆蟲的卵和幼蟲期及無翅昆蟲和蜱螨類的發(fā)育各期。活標(biāo)本先經(jīng)加溫的70%酒精（60～70℃）固定，一天后保存于5%甘油酒精（7%）中；也可用5%或10%福爾馬林和Bless液固定保存。
所有保存標(biāo)本須詳細(xì)記錄標(biāo)本名稱、宿主、采集地點(diǎn)、采集日期及采集者姓名。
樟腦混合劑配制：樟腦粉6份，氯仿1份，木餾油1份，石蠟油4份。先將樟腦粉1.5份與氯仿1份混合，隨后加樟腦1.5份與木餾油1份，用玻璃棒混勻，最后加樟腦粉3份及石蠟油4份，再攪勻備用。此混合劑易燃，宜置于嚴(yán)密而不透氣的瓶?jī)?nèi)儲(chǔ)藏。
常用固定液配制：
⑴酒精：通常用70%或75%酒精為固定液。用商品供應(yīng)95%酒精作稀釋配制。取95%酒精加至需要稀釋的濃度，再加蒸餾水到95ml即可；或者，可按下列稀釋公式配制：
所需酒精濃度 ×配成酒精量=所需原酒精量（ml）原酒精濃度
配成酒精量-所需原酒精量=應(yīng)加蒸餾水量（ml）
⑵福爾馬林（37%～40%的甲醛水溶液）：常用固定液的濃度為5%～10%。如需保持中性，在配制過程中，可在500ml原液（37%～40%的甲醛水溶液）加入約2cm厚碳酸鎂，或放幾小塊大理石（碳酸鈣）中和之；也可采用下列配方配制（10%福爾馬林）：福爾馬林原液100ml，蒸餾水900ml，碳酸二氫鈉（Na2H2PO4.H2O）4g，碳酸氫二鈉（Na2H2PO4）0.5g混合配成。
⑶布氏（Bless）液：福爾馬林原液7ml，酒精（70%）90ml，冰醋酸（臨用前加入）3～5ml混合配成。
四、原蟲低溫保存
用液氮保存原蟲，具有保持原蟲生物學(xué)特性，且保存時(shí)間較長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)僅介紹瘧原蟲、弓形蟲、人毛滴蟲及陰道毛滴蟲的低溫保存方法。
1.凍存方法
惡性瘧原蟲：將從受染者采得的抗凝含蟲血或體外培養(yǎng)的培養(yǎng)物，經(jīng)1500rpm離心10分鐘，加入與沉積細(xì)胞等量的24%二甲基亞砜（DMSO）生理鹽水溶液（0.9%生理鹽水或5%葡萄糖生理鹽水76ml中加入DMSO24ml）保護(hù)劑，充分混勻后在室溫中放置30分鐘，按0.5～1.0ml分裝入無菌安瓿（或塑料管）內(nèi)，封口（或蓋嚴(yán)）后將之放入標(biāo)明批號(hào)的紗布袋中，裝于液氮罐的提筒內(nèi)，先置于液氮罐的頸部，該處約為-70℃，30分鐘后，置液氮中（-196℃）凍存。
鼠瘧原蟲：從感染瘧原蟲第3～4天的小鼠心臟取血（或摘除眼球取血），注入試管，肝素抗凝，加入等量的10%或15%DMSO及15%或20%小牛血清為保護(hù)劑；或加入等體積的甘油、山梨醇保護(hù)液（4.2%山梨醇生理鹽水180ml加純甘油70ml），充分混勻。按照上法裝管及凍存。也可以在1mm3陽性鼠血加0.1mm3的3.8%枸櫞酸鈉抗凝之后就裝于液氮罐提筒中，立即直接置液氮中保存，2年內(nèi)多數(shù)原蟲仍有活力。
弓形蟲：用無菌注射器吸取10%DMSO2ml，注入感染4天的小鼠腹腔，抽洗2次，抽出液混勻后即注入無菌塑料管內(nèi)（0.5～1ml/管），凍存法同上。
陰道毛滴蟲：用無菌拭子取陰道分泌物，放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)，轉(zhuǎn)種于RPMI-1640培基中2天。取含蟲培養(yǎng)液經(jīng)1000rpm/min離心10分鐘，在沉淀中加入10%DMSO2ml，同上法分裝及凍存。
人毛滴蟲：取腹瀉患者的含蟲糞便培養(yǎng)于洛氏培養(yǎng)基中48小時(shí)，轉(zhuǎn)種于洛氏培養(yǎng)基或RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天后計(jì)算蟲數(shù)（達(dá)7×105）。加等量10%DMSO并加Tween-20于DMSO中。裝管同上法。但凍存過程應(yīng)先將小管置于-10℃中15分鐘，移到液氮罐頸2分鐘，再置入液氮中凍存。
上述所用的保護(hù)劑（液）均應(yīng)經(jīng)高壓滅菌，保存于4℃冰箱。RPMI-1640配制50%DMSO，用時(shí)再稀釋所需濃度，加15%或20%小牛血清，調(diào)pH至7.2。
2.復(fù)蘇與觀察在凍存1～2年，需要時(shí)從液氮罐中取出保種的小管，迅速投入37～40℃溫水中，經(jīng)4～5分鐘即溶化。取凍存的鼠瘧原蟲和弓形蟲分別經(jīng)腹腔接種2只小鼠，每只ml，觀察致病情況；也可接種后4～5天分別取鼠血或腹腔液，作涂片，姬氏液染色，鏡檢原蟲。兩種毛滴蟲可用同樣方法復(fù)蘇，但需經(jīng)培養(yǎng)3～4天后，作涂片鏡檢活動(dòng)滋養(yǎng)體，或染色觀察。
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