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基因診斷與性病/核酸探針的標記和檢測

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基因診斷與性傳播疾病

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分子雜交核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測,必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記,這條鏈就稱為核酸探針。因此,核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。常用的放射性同位素有32P和35S。32P因其能量高,信號強,所以最常用。放射性同位素標記探針雖然敏感度高,但卻存在輻射危害和半衰期限制(32P半衰期為14.3天,35S半衰期為87.1天,125I半衰期為60天),3H的半衰期長達12.3年,但它所釋放β射線的能量太低,只能用于組織原位雜交。由于同位素標記的探針在使用過程中存在著上述缺點,近年來,人們在尋找非放射性標記物方面取得了很大進展。國內已具備生物素類標記物的生產能力,并有相應試劑出售。目前非放射性標記物有下述幾類:金屬如Hg、熒光物質如F2TC半抗原地高辛、生物素、酶類辣根過氧化物酶(HRP)、半乳糖苷酶堿性磷酸酶AKP)等,不同的標記物,所標記探針的方法及檢測方法也各異。

核酸探針的常用酶促標記技術有:缺口平移DNA快速末端標記;用T4多核苷酸酶標記DNa5'末端,隨引物延伸聚合酶鏈反應

核酸探針的非放射性標記技術有:光促生物素標記核酸、酶促生物素標記核酸、寡核苷酸的生物素末端標記、酶標DNA、酶標寡核苷酸、DNA半抗原標記。

32 核酸探針的種類 | 核酸分子雜交方法 32
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