臨床生物化學(xué)/血清酶定量的檢測(cè)技術(shù)
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酶在正常和病理代謝中起著重要作用，因此酶的測(cè)定是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一項(xiàng)重要工作，在醫(yī)學(xué)研究和醫(yī)院常規(guī)工作中都要進(jìn)行大量酶的測(cè)定。但要作好酶的測(cè)定不是一件很容易的事，因?yàn)樗泻芏嗯c其它定量測(cè)定不同或獨(dú)特之處，作好酶的測(cè)定除了必須掌握一般分析技術(shù)知識(shí)外，還須了解酶測(cè)定的特點(diǎn)、方法分類和各類方法的優(yōu)缺點(diǎn)，然后根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室情況、研究目的和臨床需要，才能設(shè)計(jì)和應(yīng)用好各個(gè)具體的酶測(cè)定方法，創(chuàng)造性地作好酶的測(cè)定。
目前常用于酶定量測(cè)定的方法是測(cè)量酶的活性濃度，此方法并不直接測(cè)酶蛋白含量，實(shí)際上是測(cè)定酶催化反應(yīng)的速度，并由此間接地推算出標(biāo)本中酶濃度的高低，這是酶測(cè)定方法獨(dú)特之處。
使用間接方法并不是因?yàn)樵摲ū戎苯訙y(cè)定酶蛋白有很多優(yōu)點(diǎn)，事實(shí)上間接方法有不少不足之處，在很大程度上采用間接法是出于無(wú)奈，因?yàn)樵谒鶞y(cè)標(biāo)本中酶蛋白濃度和其它蛋白相比明顯偏低，例如在血清中大多數(shù)酶蛋白含量多在g/L水平，用一般化學(xué)方法從含量高達(dá)70g/L蛋白質(zhì)的血清中將酶蛋白分離出來(lái)并直接測(cè)定其含量顯然是很困難的。這樣科學(xué)家才想到利用酶蛋白的催化特性來(lái)測(cè)定酶；微量酶蛋白可以明顯加快所催化反應(yīng)的速度，并在特定條件下，此反應(yīng)速度（v）可和酶濃度（E）成正比例。可以下列二式表示之：
v＝△P/△t＝k.E
此式以單位時(shí)間（t）內(nèi)產(chǎn)生物（P）生成量表示反應(yīng)速度
v＝－△S/△t＝k.E
此式中以底物（S）減少量取代產(chǎn)物生成量。
以上二式是衡量測(cè)酶活性濃度方法是否準(zhǔn)確可靠的基本標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)椴皇侨魏吻闆r下酶的催化反應(yīng)速度都能與酶濃度成正比例，當(dāng)設(shè)計(jì)不當(dāng)，所選擇條件不合適時(shí)，反應(yīng)速度v雖可能隨酶濃度增加而加快，但不成正比例，即v≠k［E］，所得結(jié)果出現(xiàn)誤差，從表17-1可以清楚看到此問(wèn)題。
方法1所測(cè)反應(yīng)速度（v）和酶濃度間存在一個(gè)明顯正比例關(guān)系，各標(biāo)本μg/L和酶濃度間高度的一致，相反方法2各標(biāo)本的U/L不能準(zhǔn)確反應(yīng)酶濃度（μg/L）間的比例關(guān)系，濃度愈高誤差愈大，例如標(biāo)本5酶濃度為標(biāo)本1的5倍。但其反應(yīng)速度結(jié)果卻顯示為3.5倍，在臨床工作中這種誤差有可能給醫(yī)師診斷疾病判斷病情帶來(lái)困難，在科研工作中也有可能導(dǎo)致不恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。方法3的結(jié)果說(shuō)明在標(biāo)本1到標(biāo)本3的酶濃度之間，測(cè)定結(jié)果是準(zhǔn)確的，但在高濃度標(biāo)本時(shí)可能導(dǎo)致誤差，這是在實(shí)際工作中常能遇到的情況。
表17-1 三個(gè)測(cè)同一酶方法結(jié)果的比較
| 標(biāo)本 | 酶濃度（μg/L） | 測(cè)定結(jié)果（U/L） | ||
| 方法1 | 方法2 | 方法3 | ||
| 1 | 1 | 100 | 50 | 10 |
| 2 | 2 | 200 | 90 | 20 |
| 3 | 3 | 300 | 125 | 30 |
| 4 | 4 | 400 | 155 | 38 |
| 5 | 5 | 500 | 175 | 45 |
表17-1還顯示了酶活性濃度測(cè)定的另一個(gè)重要特點(diǎn)，即測(cè)定結(jié)果U/L的相對(duì)性，不同于用質(zhì)量單位mol/L表示濃度時(shí)高度一致性，如用不同方法測(cè)5份不同濃度血糖標(biāo)本。其絕對(duì)值（μmol/L）不會(huì)有太大差異。但在酶活性濃度測(cè)定中往往不存在這樣高的一致性。如表17-1三個(gè)法結(jié)果可在同一方法內(nèi)進(jìn)行比較。而絕不能在方法間進(jìn)行比較，否則會(huì)得出荒謬的結(jié)論。這是因?yàn)檫@些方法測(cè)的是反應(yīng)速度，只能用速度單位（一單位表示每一分鐘有1μmol/L反應(yīng)物的變化）來(lái)間接表示酶含量的高低，而速度快慢不僅受酶含量多少影響，還與其它很多因素有關(guān)，表17-1中法之所以有這樣大的結(jié)果差異，很可能是由于三種方法使用了不同種類的底物，由于酶與不同底物親和性不一樣，反應(yīng)速度的絕對(duì)值（μmol min-1）出現(xiàn)差異是不足為奇的。
這些敘述說(shuō)明了在考慮或設(shè)計(jì)酶活性濃度測(cè)定方法時(shí)，重要的是要選擇好各種條件，使在盡可能寬的范圍內(nèi)所測(cè)的反應(yīng)速率v和酶濃度E之間存在著正比例關(guān)系。
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